Desarrollo de un Kit de Diagnostico Temprano para la Nefropatia Diabetica, No Invasivo y que Permita Diferenciar la Progresividad de Esta Enfermedad mediante la Utilizacion de Exosomas Urinarios

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2013-12-29

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Diabetes Mellitus (dm) es una Enfermedad Metabólica que Tiene una Alta Prevalencia en la Población de nuestro País y en el Mundo Entero. Además es de Carácter Multisistémico lo que Genera una Mayor Predisposición a Enfermedades Derivadas Siendo la Nefropatía Diabética (nd) una de las Enfermedades Más Devastadoras. La Nd se Define Clásicamente como un Síndrome Clínico Caracterizado por la Presencia de Proteínas en la Orina. Alrededor del 30% de los Pacientes con Dm Tipo 2 Tienen un Daño Renal al Momento de Diagnosticada la Diabetes y el Resto Posee un Tiempo de Alrededor de 10 Años de Desarrollarla Si No Existe un Adecuado Manejo de la Glicemia. En Chile la Nd es la Primera Causa de Insuficiencia Renal y Requerimiento de Diálisis con un 354% de los Casos al 2012 Cifra que ha Tenido un Constante Crecimiento en las Ultimas 3 Décadas. A Pesar de que Existen Metodologías Clínicas que Han Sido Utilizadas para la Pesquisa de Esta Enfermedad Ninguna de ellas ha Tenido un Real Impacto de Diagnosticarla en Fases Tempranas de Desarrollo cuando el Porcentaje de Reversión Todavía es Alto. Algunos de Estos Métodos Han Sido Ampliamente Cuestionados ya que Existe un Gran Porcentaje de la Población que Cursa con Nefropatía a Pesar de Presentar Valores Normales de Estas Determinaciones. Por Tales Razones se Hace Necesario el Desarrollo de Nuevas Metodologías que Permitan Diagnosticar y Evaluar la Progresión de la Nefropatía Diabética desde sus Primeras Etapas de Desarrollo. Así en este Proyecto Proponemos el Desarrollo y Producción de un Kit de Qpcr de Detección de Biomarcadores de Nefropatía Diabética No Invasivo que Permitan Evaluar la Progresión de Esta Enfermedad Utilizando los Exosomas Urinarios. Consideramos que la Orina es una Fuente Ideal de Biomarcadores en Particular para las Enfermedades del Riñón y del Tracto Urinario ya que Puede Ser Muestreadas en Grandes Cantidades sin Riesgo para el Paciente. Particularmente Proponemos el Aislamiento de Exosomas en Orinas de Pacientes Normales y Diabéticos para Estudiar los Niveles Diferenciales de Mrnas como Biomarcadores Específicos. La Orina Está Compuesta en un 3% por Vesículas de 40-100 Nm Conocidas como Exosomas las Cuales Son Secretadas por las Células y Llevan Consigo Proteínas Mrna y Microrna Provenientes de la Gran Mayoría de Células Epiteliales que Componen la Nefrona y sus Conductos por lo cual Proveen una Completa Representación del Sistema Urinario. Debido a esto los Exosomas Urinarios Tienen un Valor Potencial de Ser una Fuente de Biomarcadores para la Detección de Varios Tipos de Enfermedades Monitoreando su Evolución y Respuesta a la Terapia. Nosotros Postulamos que los Exosomas Urinarios es un Excelente Método para la Detección Temprana de la Nefropatía Diabética. Para Determinar los Cambios en los Niveles de Expresión Génica Proponemos Realizar un Completo Rastreo de Marcadores que se Ven Alterados en el Desarrollo y Progresión de la Nd mediante el Aislamiento de Exosomas Provenientes de Muestras de Orina de Pacientes Normales y Diabéticos a Través de Avanzadas Técnicas de Biología Molecular como Proteomica y Microarreglos de Dna. Luego se Diseñaran Sondas Especificas contra Estos Marcadores y se Procederá a Validar Técnicas de Qpcr mediante Muestras Provenientes de Ratas Controles y Diabéticas con Distinto Grado de Nd ya que nuestro Grupo de Trabajo Tiene una Amplia Experiencia en la Investigación de Estos Modelos Murinos y el Daño Renal que Éstos Producen. Por Último se Validaran los Prototipos de Kit (qpcr y Eventualmente Test de Elisa) en Muestras Humanas y se Compararan con los Métodos Clínicos Más Utilizados en la Actualidad. Estos Kit de Diagnostico Permitirán Solucionar el Precario e Insuficiente Manejo Preventivo de las Etapas Iniciales y Reversibles de la Nefropatía Diabética Disminuyendo los Altos Costos que le Generan al Estado Subsidiar los Tratamientos de Sustitución Renal y Además con una Buena Posibilidad de Posicionarse Globalmente como un Método Eficaz Precoz y Predictivo para el Diagnostico de Nefropatías Diabética.

Description

Desarrollo y Producción de un Kit de Qpcr de Detección de Biomarcadores de Nefropatía Diabética No Invasivo que Permitan Evaluar la Progresión de Esta Enfermedad mediante la Utilización de Exosomas en Muestra de Orina.
Difusión Protección y Transferencia Tecnológica de los Resultados al Sistema de Salud para la Optimización de la Gestión y Condición Sanitaria de los Pacientes Diabéticos.
Evaluación de los Biomarcadores Seleccionados en Muestras de Orina de Ratas Normales y Diabéticas con Distinto Grado de Daño Renal a Través de Técnicas de Biología Celular y Molecular
Identificación y Selección de Biomarcadores que Evalúen Etapas Tempranas y Tardías de la Nefropatia Diabética mediante el Aislamiento de Exosomas Provenientes de Orinas de Pacientes Sanos y Diabéticos.
Validación Clínica de los Prototipos de Kit de Diagnósticos en Pacientes Normales y Diabéticos.

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