Desarrollo, validación e implementación de una técnica rápida de identificación de pseudocóccidos cuarentenarios, mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real), para la reducción de rechazos cuarentenarios a la producción de la industria fru
Date
2011-10-04
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
La industria frutícola de exportación debe cumplir con múltiples exigencias de los mercados de destino incluyendo múltiples normas de tipo cuarentenario que en algunos casos restringen la posibilidad de exportar el producto. Es decir que una vez alcanzados los estándares de calidad condición y en la mayoría de los casos de certificación del proceso la fruta a exportar se debe ser sometida en muchos casos a los procesos de inspección fitosanitaria con el fin determinar si cumple con un determinado status fitosanitario asociado a normas de ingreso de protección del patrimonio fito- y zoo-sanitario que fijan los distintos países. En el país existen seis especies de la familia Pseudococcidae (chanchitos blancos) de status cuarentenario para distintos mercados las cuales ocasionan anualmente significativas pérdidas a la industria por rechazos de aquellas partidas de fruta donde se detecta un individuo del género Pseudococcidae. Cabe señalar que dado que dichas detecciones se realizan principalmente en estados inmaduros de la plaga no es factible de identificar a qué especie pertenece. Estudios previos del Servicio Agrícola y Ganadero e INIA han establecido a través de estudios de genética molecular que el porcentaje de individuos cuarentenarios sería bajo en relación a otras especies de distribución cosmopolita. El proyecto buscará resolver las dificultades relativas a la identificación por caracteres morfológicos la especie de Pseudococcidos en los estados mencionados y que derivan en rechazos para la exportación del lote o partida de fruta presentado a inspección en particular a través de la implementación de técnicas de identificación rápida de chanchitos blancos (Pseudococcidae) cuarentenarios mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real) que puedan ser utilizadas en los sitios de inspección de fruta fresca en Chile con el fin de disminuir las pérdidas causadas por rechazos cuarentenarios atribuidos a la mencionada especie. Para ello el proyecto considera las siguientes etapas:1.- Desarrollo de kits de identificación de Pseudocóccidae cuarentenarios para implementar la técnica de análisis mediante PCR en tiempo real en los laboratorios del SAG.2.- Validación de la técnica con USDA para su aceptación oficial mediante la ejecución de un estudio paralelo entre identificación taxonómica e identificación por PCR en tiempo real. 3.- Difusión y transferencia incluyendo la determinación del equipamiento necesario para efectuar PCR en tiempo real en los sitios de inspección de SAG el instalarlo en los sitios de inspección de las Regiones Metropolitana y capacitación a personal SAG para ejecutar la técnica. La metodología a utilizar corresponde a PCR en tiempo real la cual se basa en la amplificación de determinados segmentos seleccionados de la cadena de DNA de las muestras las que comparadas contra patrones estándares permiten la identificación inequívoca de las especies. Debido a estas incertidumbres hoy día en Chile se rechazan a nivel de sitios de inspección SAG 261.156 cajas de diversas especies frutícolas de exportación en su última etapa antes de proceder a los embarques. Ello representa un valor sobre 2 6 millones de dólares en rechazos anuales debidos a la imposibilidad existente en la identificación de estados inmaduros lo cual se espera reducir al menos en un 50% al contar con la metodología inequívoca para la identificación. Hoy existen equipamientos que permiten efectuar esta determinación en breve plazo (no más de dos horas) lo cual permite que el PCR en tiempo real haya tomado las características de un análisis de apoyo a la operación en diversas industrias. En este caso se pretende utilizar la técnica para identificar aquellas muestras de Pseudococcidae que visualmente debido a sus estados inmaduros no es posible identificar por lo cual se asumen como cuarentenarias. Como producto o resultado esperado se espera al término del proyecto contar con:1.- La técnica para identificar Pseudococcidae cuarentenarios mediante PCR en tiempo real.2.- Capacidades para la producción de kits de identificación de las especies cuarentenarias de Pseudococcidae. 3.- Confirmación de la validez de la técnica4.- Instalar en un sitio de inspección lugares donde el SAG efectúa toma de muestras de lotes de fruta para exportación y efectúa el análisis de presencia de insectos y ácaros cuarentenarios.5. Modelos tecnológico que permitiría aplicar esta metodología de trabajo a otras especies cuarentenarias. La industria frutícola de exportación debe cumplir con múltiples exigencias de los mercados de destino incluyendo múltiples normas de tipo cuarentenario que en algunos casos restringen la posibilidad de exportar el producto. Es decir que una vez alcanzados los estándares de calidad condición y en la mayoría de los casos de certificación del proceso la fruta a exportar se debe ser sometida en muchos casos a los procesos de inspección fitosanitaria con el fin determinar si cumple con un determinado status fitosanitario asociado a normas de ingreso de protección del patrimonio fito- y zoo-sanitario que fijan los distintos países.En el país existen seis especies de la familia Pseudococcidae (chanchitos blancos) de status cuarentenario para distintos mercados las cuales ocasionan anualmente significativas pérdidas a la industria por rechazos de aquellas partidas de fruta donde se detecta un individuo del género Pseudococcidae. Cabe señalar que dado que dichas detecciones se realizan principalmente en estados inmaduros de la plaga no es factible de identificar a qué especie pertenece.Estudios previos del Servicio Agrícola y Ganadero e INIA han establecido a través de estudios de genética molecular que el porcentaje de individuos cuarentenarios sería bajo en relación a otras especies de distribución cosmopolita. El proyecto buscará resolver las dificultades relativas a la identificación por caracteres morfológicos la especie de Pseudococcidos en los estados mencionados y que derivan en rechazos para la exportación del lote o partida de fruta presentado a inspección en particular a través de la implementación de técnicas de identificación rápida de chanchitos blancos (Pseudococcidae) cuarentenarios mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real) que puedan ser utilizadas en los sitios de inspección de fruta fresca en Chile con el fin de disminuir las pérdidas causadas por rechazos cuarentenarios atribuidos a la mencionada especie.Para ello el proyecto considera las siguientes etapas:1.- Desarrollo de kits de identificación de Pseudocóccidae cuarentenarios para implementar la técnica de análisis mediante PCR en tiempo real en los laboratorios del SAG.2.- Validación de la técnica con USDA para su aceptación oficial mediante la ejecución de un estudio paralelo entre identificación taxonómica e identificación por PCR en tiempo real. 3.- Difusión
Description
Desarrollar, validar e implementar técnicas de identificación rápida de Pseudocóccidos cuarentenarios mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real) que puedan ser utilizadas en la inspección de fruta fresca en Chile con el fin de disminuir las pérdidas causadas por rechazos cuarentenarios atribuidos a la mencionada especie.
Keywords
Tecnología apropiada, Normas de exportación, Análisis, Plaga agricolas